尊龙凯时的稀释法测定最小抑菌浓度（MIC）是一种用以评估抗菌剂对微生物生长抑制能力的实验技术。主要包括微量稀释法与常量肉汤稀释法两种方式。琼脂稀释法的操作简便且成本低，特别适合高通量筛选和自动化操作，能够精确控制药物浓度。而肉汤稀释法则直观易于操作，适合实验室规模的测试，可以根据实验需求灵活调整药物浓度和培养基体积。

琼脂稀释法

1. 原理：本实验采用琼脂稀释法，将不同浓度的抑菌剂溶解于琼脂培养基中，并点种细菌。通过观察细菌的生长特征，确定抗（抑）菌物质能够抑制受试菌生长的最低浓度，即最小抑菌浓度（MIC）。此方法适用于不溶性抗（抑）菌产品。

2. 操作步骤：

(1) *抗（抑）菌溶液的配制*：在无菌条件下，将5ml或5g（经过研磨的固体）样品放入45ml灭菌的磷酸缓冲液中，充分震荡溶解，制成10%的均匀溶液或悬液。

(2) *含抗菌剂的培养基配制*：将10%的抗（抑）菌溶液用PBS以对倍系列稀释成不同浓度的受试液，置于45℃-50℃的水浴中保持恒温备用。

(3) *双倍浓度培养基配制*：取76g MH琼脂培养基溶于1000ml水中，加热至沸腾以完全溶解，然后在121℃下进行压力蒸汽灭菌15分钟，最后置于45℃-50℃的水浴中备用。

(4) *含抗（抑）菌液的培养基配制*：将10ml系列稀释的抗菌液加入平皿内，再加入10ml双倍MH琼脂培养基，边加边轻轻摇晃平板，以确保抗（抑）菌液与培养基充分混匀，待其凝固后备用。

(5) *接种*：使用加样器取1μl-2μl（菌量约为107cfu/ml）菌悬液点种于含抗（抑）菌液的平皿上，接种后细菌液圈的直径应为5mm-8mm（每个点的菌量约为104cfu）。

(6) 以同样方法在不含抗（抑）菌成分的MH琼脂平板上接种作为阳性对照。

(7) 将接种后的平板置于35℃的培养箱中倒置培养18小时至24小时，观察结果。

3. 评判标准：完全抑制菌落生长的最低抗（抑）菌液浓度即为该样品对受试菌的MIC，单一菌落的生长可视为忽略不计。

营养肉汤稀释法

1. 原理：本实验通过将不同浓度的抑菌剂混合于营养肉汤培养基中接种细菌，从而确定抗（抑）菌剂抑制受试菌生长的最低浓度（MIC）。此方法适用于可溶性抑菌产品。

2. 操作步骤：

(1) 根据2112所示方法制备金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的悬液。

(2) *含抗菌剂的培养基配制*：将抗（抑）菌溶液用蒸馏水进行对倍系列稀释，取各稀释度的25ml受试液加入25ml双倍浓度的营养肉汤试管中。

(3) *接种*：取0.1ml的细菌悬液（约108cfu/ml）接种至含抗（抑）菌剂的营养肉汤试管中，作为实验组样本。

(4) 采用相同方法接种不含抗（抑）菌剂的营养肉汤试管作为阳性对照组样本。

(5) 另外准备两支含有营养肉汤的试管作为阴性对照组样本。

(6) 将实验组样本、阳性对照组样本及阴性对照组样本放至37℃的培养箱中培养48小时，并观察结果。

(7) 在试验中，应对试验用菌悬液进行活菌计数，其作用浓度应为5×10^5cfu/ml-5×10^6cfu/ml。

3. 评判标准：当阳性对照管出现细菌生长（混浊），而阴性对照管则无菌生长（透明），同时试验用菌悬液的浓度在5×10^5cfu/ml-5×10^6cfu/ml时，实验组无菌生长的最高稀释度对应的抗（抑）菌剂浓度即为该样品对受试菌的MIC。

通过以上实验步骤，尊龙凯时致力于为科研人员提供准确的微生物抑制检测方法，推动生物医疗领域的发展与创新。