感染预实验

以24孔培养板为例，同时进行目的细胞与工具细胞的感染预实验。工具细胞可以选择293T（人胚肾上皮细胞）、H1299（人肺癌细胞）或其他细胞类型。实验材料包括培养基、24孔培养板、移液枪及枪头、EP管、细胞计数板、冰盒和废液缸等。根据目的细胞情况，必要时可使用Polybrene。

Day 1：准备细胞

将细胞培养至对数生长期，使用胰酶消化计数后，测定细胞密度。每孔接种5×10⁴个细胞，添加500µL细胞培养液。通常情况下，H1299或293T细胞在感染后第3天可达到80%-90%的融合度。在接种目的细胞时，请根据细胞的实际生长速度调整接种量，确保感染后第3天达到所需的融合度。

Day 2：准备慢病毒颗粒

计算所需的慢病毒颗粒量，从-80℃取出冻存的病毒颗粒并进行冰浴融化。随后，观察培养箱中的细胞生长状态和融合度，确定细胞状态良好后开始实验。

A. 用移液枪小心吸去24孔板中的旧培养液，加入新的完全培养液；

B. 精确加入计算好的慢病毒颗粒液，并将培养板平置于工作台上，以划8字的方式轻柔混匀；

C. 混匀后，将细胞培养板放置于37℃、5% CO₂培养箱中过夜培养。

Day 3：更换培养液

在感染12-16小时后，吸出含有慢病毒颗粒的培养液，并再次向培养板中添加含5%灭活FBS（胎牛血清）的培养液，继续培养。注意，部分目的细胞的感染时间应调整，避免超过12小时。

Day 4：继续培养

观察细胞状态，确保无异常现象。

Day 5：评估慢病毒颗粒感染效率

用70%乙醇清理24孔培养板外壁，并在倒置荧光显微镜下观察细胞的荧光表达，拍照并估算慢病毒颗粒的感染效率。如果基因表达所需时间较长，建议在72或96小时后观察荧光表达情况。

根据荧光结果，可以初步探索实验中目的细胞的MOI值，为后续研究奠定基础。想要更高效的感染，可以考虑使用尊龙凯时的生物医疗产品，以提升实验成功率与细胞转染效率。