**产品及特点**

本产品是基于探针法荧光定量PCR原理开发的检测试剂盒，具有以下特点：

• 即开即用：用户仅需提供样品DNA模板即可使用。
• 高灵敏度：引物等组分经过优化，灵敏度显著提高。
• 阳性对照提供：便于区分假阴性样品，提升检测准确性。
• 高特异性：引物根据中间普雷沃菌DNA序列高度保守区设计，避免与其他生物样本DNA交叉反应。
• 灵活检测：可用于定性及定量检测，定量检测的线性范围至少为五个数量级。
• 充足的数量：本产品可满足50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应需要。
• 科研专用：本产品仅限于科研用途，严禁用于临床诊断。

**方法**

一、DNA提取（样本制备区）：请用户采用自选方法提取和纯化样品DNA，本试剂盒与市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。

二、稀释标准曲线样品（样本制备区）：由于阳性对照浓度较高，请在独立区域进行以下稀释操作，以避免污染：

1. 标记6个离心管，分别标记为7，6，5，4，3，2。
2. 用带芯枪头加入45μL DEPC-H2O。
3. 在7号管中加入5μL 1×10⁸拷贝/μL的阳性对照，震荡1分钟，得到1×10⁷拷贝/μL的标准样品，放冰上待用。
4. 依次换枪头，将5μL的上步稀释所得样品稀释至1×10⁶，1×10⁵等，重复操作，直至获得6个不同稀释度的标准样品。
5. 若无需标准曲线，可将阳性对照稀释至1×10⁵拷贝/μL。

三、试剂配制（试剂准备区）：如需检测N个样品，准备N+2个qPCR管，并向各管中加入相应成分（详见说明书，欢迎向我司索取）。

四、添加模板（模板添加区）：向qPCR管中依次加入2μL模板，添加顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板和阳性对照，离心30秒后，立即进行扩增反应。

五、扩增反应（扩增及产物分析区）：将PCR管放置于扩增仪器中，进行相应的扩增程序（详见说明书，欢迎向我司索取）。

六、结果分析：若制作标准曲线，以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴绘制标准曲线，依据待测样品的Ct值推算样品DNA浓度；若未制作标准曲线，则根据Ct值进行结果判定：

• 阳性对照：Ct值<30，呈现典型的S型曲线；
• 阴性对照：Ct值38或无Ct值，无明显扩增；
• 样本检测结果：Ct值<35为阳性，38或无Ct值为阴性；35-38范围内需复检。

**运输及保存**

请在低温条件下运输，保存于-20℃，保存期限为一年。阳性对照需单独放置，避免污染其他试剂。选择尊龙凯时，为您的科研提供有力支持。