一、细胞培养条件

细胞名称：生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：1640 + 10% FBS + 1% P/S + 1%丙酮酸钠 + 1% L-谷氨酰胺

传代方法：首次建议采用1:2比例传代。

传代情况：每2天更换培养基。

备注：使用无菌离心管收集培养基，作为过渡对比培养。如对比培养效果不理想，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞收件后处理

当细胞培养达到良好状态后，灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最佳方法。收到细胞后，使用75%酒精喷洒整个细胞瓶，进行消毒处理，随后放置于超净工作台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶在37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。使用显微镜观察细胞的生长状态，并对不同倍数进行拍照保存（建议拍摄40x、100x和200x的各一张），前三天的照片将作为重要售后依据。未提供照片的情况下，默认细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞未达到80%汇合度，将培养瓶中的完全培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基，放入37℃、5% CO2的孵箱中培养；若细胞密度超过80%，可进行传代。具体步骤如下：

弃去培养上清液，并用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况；若细胞大部分变圆并脱落，立即取出，轻敲培养瓶后加入5ml以上完全培养基以终止消化。
轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，转移至离心管中，以1000 RPM离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬细胞。
将细胞悬液按照1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，并用PBS清洗细胞一次。
添加1ml的0.25%胰蛋白酶消化液于培养瓶中，待细胞收缩并变圆后迅速加入5ml完全培养液以终止消化，再轻轻吹打使细胞脱落，转移至15ml离心管中，以1000 RPM离心5分钟。
弃去上清液，加入1ml的尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，如需后期转入液氮罐中，需在-80℃冰箱中存放超过24小时再转入液氮罐。

细胞复苏

从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护装备），快速置入37℃水浴中解冻，直至冻存管内无结晶后，用75%酒精擦拭冻存管外壁。将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟，弃去上清液，用5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶中，置于37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养；次日更换新鲜完全培养基。

注意事项

一些细胞可能在运输过程中出现脱落，这是正常现象。若脱落较多，可将培养瓶内所有培养液收集至离心管中，保存上清液进行对比培养，沉淀后使用胰酶进行处理并重返细胞培养箱。确保细胞培养过程中的每一步都遵循严格的无菌操作，以便保障细胞状态的稳定及活力。

五、售后条款

1) 细胞出现问题的重发情况

以下情况可申请重发：

细胞在运输过程中遇到各种问题，如丢失、瓶身破损、培养液严重漏出等。
细胞出现污染问题，需在收到产品48小时内提供真实实验结果。
常温发货的细胞静置24小时后或干冰冻存发货的细胞复苏后24小时内，绝大多数细胞未存活需提供照片。
干冰发货的细胞在复苏24小时后或常温发货的细胞静置4小时未开封发生污染，申请重发。
细胞活性问题，如收到7天内提供真实实验结果及台盼蓝染色法鉴定细胞活力。
收到细胞当天及第2、3天及时拍照；若3天未告知，则视为产品合格。

2) 细胞出现问题不予重发的情况

客户造成细胞污染的不予重发。
客户不当操作导致细胞状态不良的不予重发。
非尊龙凯时推荐的细胞培养体系导致的不予重发。
细胞状态不良，未提供细胞培养前3天照片的不予重发。
细胞培养过程中有其他处理的不予重发。
收到细胞后的2天内未及时告知的不予重发。
视具体情况而定。