不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳的定义
尊龙凯时的凝胶电泳系统是在不同的条件下进行分离,包括pH值、离子强度、缓冲液成分和凝胶孔隙大小的变化。此技术旨在提升分离效果的范围和分辨率,使其在生物医疗研究中发挥重要作用。
不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理
不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳采用两种以上的缓冲液成分及不同的pH值,并在电泳过程中形成不均匀的电位梯度。这种电位差产生了浓缩效应、电荷效应和分子筛效应,为分子分离提供了更加细致的条件。
浓缩效应
在电泳的开始阶段,样品通过浓缩胶被聚集成高浓度的薄层(通常可浓缩几百倍)。一旦通电,解离度最高的Cl-离子迅速迁移,被称为快离子。随之而来的是解离度较低的蛋白质,最后是泳动速度最慢的甘氨酸离子(pI=6.0)。这种快离子的移动创造了低离子浓度区,产生较高的电势梯度,进一步加速了在低电势区域内的蛋白质迁移。因此,在到达小孔径的分离胶之前,蛋白质在移动界面处被集中形成薄层。
电荷效应
当各类离子进入pH 8.9的小孔径分离胶后,甘氨酸的电泳迁移率很快超过其他蛋白质,导致高电势梯度的消失。由于各蛋白质的等电点不同,其带电量和在电场中受的引力也各有不同,电泳经过一定时间后,各种蛋白质就会依顺序排列成不同的区带,展现出独特的分布特征。